原位雜交是一種重要的生物技術手段,主要利用DNA雙鏈分子和特異性Probe分子建立原位雜交反應,當Probe分子靠近DNA雙鏈時,Probe分子上的特異性引物將在DNA雙鏈上的特異序列處引發雙鏈鏈接,從而形成一個叫做雜交的物料,然后利用特異的標記物及檢測儀器,反映其存在與否及定量內容。
原位雜交是利用
原位雜交儀將特異性的核酸直接定量地檢測到實時熒光發射,從而將基因表達水平空間化地進行定量檢測,集成了變性/雜交、雜交、多步運行三種操作模式,適用于各種原位雜交實驗,是一種重要的實時定量PCR檢測方法。
儀器特點:
?。?)敏感性高:非特異性污染非常低,可以檢測非常少量的mRNA、DNA等物質,具有很強的敏感性。
?。?)靈敏度高:由于具有單一分子靈敏度,比傳統的定量PCR方法更加靈敏,可以快速檢測微量物質的變化情況。
?。?)節省時間:與傳統的PCR定量方法相比,原位雜交儀不需要建立分子生物學實驗,只需在準備好的裝置上放置樣品和Probe,就可以節省大量的實驗時間。
(4)精確度高:可以精確地測量和檢測具有特異性標記或Probe物質的變化,可以更準確地定量和計算細胞內的mRNA和DNA含量,確保定量結果的準確性。
(5)高通量:在同一儀器上可以對多種不同的環境或細胞樣品進行同步檢測,實現大量樣品、少量試驗、快速實驗,從而實現了高通量檢測和實驗效率。
原位雜交儀作為一種重要的定量PCR方法,已深受臨床、醫學和生物學研究領域的青睞,在基因組學、藥物研發、新藥篩選等領域中得到廣泛應用。它不僅可以對基因表達水平進行定量檢測,而且可以檢測少量物質的變化情況,更能夠精確地測量和計算DNA和mRNA的含量,具有非常重要的臨床研究價值。